超高分辨率熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,超高分辨率熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
在選擇光源時(shí), 還需注意到弧光尺寸, 即光源發(fā)光區(qū)的大小。如汞燈50W 弧光尺寸為110×013mm ,200W 為212×015mm , 而100W 為0125×0125mm。能否正好充滿系統(tǒng)的入瞳使光能充分利用, 對(duì)一個(gè)優(yōu)良的超高分辨率熒光顯微鏡, 各種倍率的物鏡“光能”皆可充分有效的利用是一個(gè)值得關(guān)注的指標(biāo)。
在超高分辨率熒光顯微鏡設(shè)計(jì)中, 光源選擇在總體設(shè)計(jì)中是至關(guān)重要的, 它決定了儀器的使用范圍和成本, 也反映了儀器的檔次。實(shí)驗(yàn)室以上的超高分辨率熒光顯微鏡應(yīng)以汞燈為主光源.
光源選擇其次要考慮它的功率, 選用大功率還是低瓦數(shù)的燈泡? 原則上講應(yīng)盡可能選用低瓦數(shù)的光源, 無疑這對(duì)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和成本是有利的。但過低的瓦數(shù)在激發(fā)時(shí)不能激發(fā)出熒光或發(fā)出熒光不穩(wěn)定, 就不能使用了。而能否激發(fā)出熒光又與整個(gè)成像系統(tǒng)的光能利用相關(guān), 能充分合理有效地利用光能, 瓦數(shù)就可以降下來, 單純地追求大功率光源作為熒光檢測(cè)并不可取, 還會(huì)引發(fā)熒光的衰減和猝滅。
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